Chinches De
CamaCimex LectulariusCriar Chinches
Mantenimiento
de una colonia de laboratorio de Cimex lectularius (Hemiptera: Cimicidae)
utilizando una técnica de alimentación artificial
RESUMEN: La técnica de mantenimiento in vitro descrita
en este artículo ha sido utilizada exitosamente para criar Cimex lectularius
(L.) alimentando todos los estadios ninfales y adultos por más de dos años
mediante parafilm “M”, sellado película sellada con distintos tipos de sangre.
Utilizando esta técnica de alimentación, la producción de huevos subsecuente de
hembras de chinches de la cama fue extraordinariamente alta. La sangre fue
mantenida a 37 C para potenciar la adhesión de las chinches de cama. Se
investigó el efecto de los métodos de anticoagulación y se encontró que la
sangre heparinizada era la más adecuada para alimentar a las chinches de cama.
Todos los estadios de chinches de la cama alimentados semanalmnete con sangre
en el sistema artificial se mantivieron adheridas hasta 0.5 – 1 h, hasta que
completaron su alimentación de sangre, y todos alcanzaron los pesos de
ingurgitación. Más del 90% de las chinches de cama se alimentaron
artificialmente de sangre completa mudaron y pusieron huevos con éxito.
Ilustración aparecida en el artículo original de Montes, C.
KEY WORDS:
Cimex lectularius, alimentación artificial, chinches de cama
El cultivo
de parásitos en laboratorio y los estudios sobre patógenos transmitidos por las
garrapatas y los insectos han dependido del uso de animales experimentales
(Bailey 1960, Branagan 1969, Norval et al. 1992). La chinche de cama, Cimex
lectularius (L.), es un parásito chupador de sangre común en climas templados y
subtropicales que ataca humanos, aves y otros mamíferos (Kettle 1995). Aunque
no se han relacionado con la transmisión de alguna enfermedad, se ha demostrado
que puede ser vector de los organismos causantes de la peste, fiebre
recurrente, tularemia, fiebre Q y hepatitis B (El-Masry y Kotkat 1990). La
transmisión de la hepatitis es teóricamente posible por la contaminación al
aplastar el insecto, contaminación con heces infectadas, o regurgitación
durante la picadura (Jupp et al. 1983). La transmisión de los tripanosomas se
ha demostrado para murciélagos (Gardner y Molyneux 1988). Durante décadas, este
parásito se ha usado como modelo experimental, representando artrópodos, para
detectar las actividades de ectoparásitos de diferentes fármacos ensayados. La
necesidad de una producción económica de grandes cantidades de esta especie en
edades sincronizadas para estudiar la infección y del ciclo de vida, así como
para la realización de pruebas de detección de insecticidas para fines de
control, nos llevó a desarrollar un método de alimentación con sangre mediante
una membrana artificial eficaz y uniforme que podría alimentar a los cinco
estadios.
El uso in
vitro de técnicas de alimentación para la cría en masa y el mantenimiento de
ectoparásitos tiene grandes ventajas en términos de conveniencia, productividad
y el gasto financiero en lugar de la alternativa de los procedimientos in vivo
(Sonenshine 1991). Este trabajo describe el desarrollo de una técnica de
alimentación por membrana que permite la producción a gran escala de Cimex
lectularius (chinches de cama), alimentando todos los estadios con sangre
fresca heparinizada de pollo a través de una película de sellado Parafilm
(Laboratory Film, American National Can, Green-wich, CT).
Materiales y
Métodos:
Colonia de
chinches de cama, Cimex lecularius (Figs. 1A y B), se obtuvieron de BASR
(Investigación Básica de Ciencia Animal), Merck Research Laboratories (Rahway,
NJ), donde estos parásitos fueron alimentados con la sangre de cobayas más de
diez años.
La colonia
se mantuvo elevada, alimentada en frascos de boca ancha (20 cm de alto por 8 cm
de diámetro) que contiene tiras de papel de filtro. Los frascos (dos o tres por
cada etapa de la colonia) se cubrieron con tela de malla fina para ventilación,
que se mantuvo en su lugar con una banda elástica. Los insectos fueron
separados en función del estadio y los tarros, mantenidos a una temperatura
constante de 28 º C y 70% RH en una incubadora no iluminada como se describe
por Schwan et al. (1991) para criar
Ornithodoros moubata (Murray, 1877).
Para
anestesiar para un fácil manejo los insectos se utilizó una fuente de CO2. De 7
– 8 días después de cada comida, las hembras adultas depositaron sus huevos en
las tiras de filtro de papel. Los huevos
eclosionaron en 5 – 7 días. Se separaron los diferentes estadios después de
cada muda y estas fueron quitadas.
Cada estadio
mudó al estadio siguiente en 5 – 7 días después de alimentarse con sangre. En
ese momento estuvieron listos para la próxima comida de sangre. Todos los
grupos de estadio fueron alimentados cada semana.
Alimentación
sanguínea de chinches. Se probó el efecto de los métodos de anticoagulación
para la harina de sangre. Se utilizaron cuatro diferentes tipos de sangre:
sangre heparinizada recién extraída de pollos y ganado vacuno, sangre
desfibrinada comercial de cordero (Oxoid, SA), y sangre heparinizada de cordero
(Soria Melguizo). En nuestras condiciones, el ciclo de vida desde la eclosión
de los huevos a la etapa adulta duró entre 35 y 45 días.
Sistema de
alimentación artificial. El aparato de alimentación (a medida por Afora, SA)
consistió en un recipiente de vidrio con la membrana Parafilm “M” colocada en
la parte inferior (Figs. 2 y 3). La membrana se estira para mantenerla en su
lugar y facilitar la alimentación. Para aumentar la adhesión de las chinches,
la sangre, alrededor de 4-5 ml por alimentador, se mantuvo a 37 º C usando un
baño caliente con una bomba para hacer circular el agua a través de los alimentadores
de vidrio. Las chinches fueron alimentadas con los tipos de sangre respectivos
hasta que estuvieron repletas y se habían separado de la película de sellado.
Las tiras de
papel fltro (Ref Albet. 101/240) tienen que ser colocadas de tal manera que
garanticen el contacto directo con el revestimiento del frasco, para permitir
que los insectos lleguen a la harina de sangre a través de la tela de malla y
la membrana de parafilm. Es esencial que todas las partes de la membrana estén
en contacto con la sangre, de modo que los insectos al insertar sus partes
bucales puedan encontrar sangre en lugar de bolsas de aire. Todos los estadios
de Cimex lectularius (chinches de cama) fueron alimentados con los distintos
tipo de sangre una vez a la semana. El sistema permite el uso de cuatro a seis
alimentadores de vidrio dispuestos en paralelo en todo momento.
Ilustración procedente del artículo original de Monte, C. (2002)
Resultados:
Se
estableció y mantuvo una nueva colonia de Cimex lectularius (chinches de cama) más de 2 años, a partir de
las ninfas de cuarta etapa. La alimentación artificial a través de la película
de sellado Parafilm “M” fue el único método utilizado para alimentar las
diferentes etapas de desarrollo de este parásito. Cada semana se alimentaron
todas las etapas y se obtuvieron nuevos huevos.
Todas las
etapas de chinches se alimentaron de la sangre en el sistema de alimentación
artificial permaneciendo unidas hasta 0.5-1.0 h, hasta finalizar su
alimentación de sangre y la mayoría de ellas alcanzaron el peso de
ingurgitación. Se les reconoce fácilmente por sus cuerpos hinchados. Pocas
chinches tomaron sólo una comida parcial de sangre (Fig. 1B).
No hubo
chinches unidas a la membrana cuando la sangre estuvo a temperaturas inferiores
a 35ºC; por lo tanto, la sangre se mantuvo a una temperatura constante de 37 º
C para facilitar la atracción de las chinches.
Las ninfas y
adultos lograron una mejor ingurgitación y un mayor número de huevos cuando
fueron alimentados con sangre entera con heparina como anticoagulante que con
sangre desfibrinada. Se utilizó sangre de tres animales distintos: vacuno,
ovino y pollo. Se obtuvieron idénticos resultados cuando la sangre se incorporó
a partir de fuentes comerciales o se extrajo recientemente y el anticoagulante
usado fue heparina. En cada experimento de alimentación, la velocidad de
alimentación promedio de diferentes estadios fue 90-100% cuando se utilizaba
como dieta la sangre heparinizada fresca.
Cuando se
utilizó sangre comercial de cordero desfibrinada, la producción de huevos
disminuyó de manera tan dramática que era imposible obtener una nueva
generación.
Discusión:
Comenzamos
nuestra colonia de Cimex lectularius
(chinches de cama) de ninfas de cuarto estadio donados por nuestros
colegas de Rahway, NJ. Le Sueur et al. (1993) obtenidas de algunas de sus
colonias (por ejemplo, Cimex lectularius) de otros entomólogos, y consideraron
que eran muy importantes las adaptaciones a nuevas fuentes de alimento como
conejillos de indias anestesiados. Estas técnicas in vivo y los experimentos
derivados de ellos son caros, imprecisos, normalmente requieren de
instalaciones de retención y causan incomodidad en el animal experimental.
Mediante el desarrollo de las técnicas de alimentación in vitro, es posible
eliminar en gran medida la necesidad de utilizar animales vivos de
experimentación.
Este estudio
reporta el mantenimiento del ciclo de vida de Cimex lectularius durante más de
2 años usando alimentación artificial. Schwan et al. (1991) reportaron la
alimentación artificial de O. moubata utilizando una membrana Parafilm; sin
embargo, el diseño de su aparato difiere del nuestro. Un alimentador artificial
muy similar fue descrito por García et al. (1975) para el mantenimiento de
Rhodnius prolixus.
En nuestro
estudio, ninfas y adultos obtuvieron mejores pesos de ingurgitación cuando se
alimentaron de sangre entera con heparina como anticoagulante que con sangre
desfibrinada. Observaciones similares fueron reportadas con Amblyomma
variegatum (F.) por Voigt et al. (1993).
Moloo (1971)
informó de que la temperatura de la sangre es uno de los factores más críticos
en la alimentación por membrana de Glossina. Wallade et al. (1991) mantuvieron
un baño de agua a 42 º C para calentar la comida de sangre y las membranas a 37
º C, porque suponían que el gradiente de temperatura era un factor importante
para unir las garrapatas a la membrana. En nuestro estudio, se reprodujeron
estas condiciones y se obtuvo una alimentación eficiente.
Ulustración procedente del artículo original de Montes, C. (2002)
Pagot et al.
(1973) llevaron a cabo ensayos de alimentación artificial de otros insectos,
Glossinidae, a través de una membrana de silicona sintética. Estas membranas
químicamente inertes tienen cualidades físicas que les permiten ser
esterilizadas a altas temperaturas y conservarlas indefinidamente. Aunque las
membranas Parafilm no pueden ser esterilizadas, el coste es tan bajo que se
puede utilizar una nueva membrana cada vez. Slama y Williams (1966) describen
la acción del “factor de papel” como un inhibidor del desarrollo embrionario de
la chinche de cama europea; en contraste, no se observó ningún efecto derivado
de las tiras de papel de filtro.
Este sistema
de alimentación artificial se podría aplicar para mantener diferentes ciclos de
vida de otros artrópodos hematófagos. Por ejemplo, en nuestro laboratorio,
todas las etapas del ciclo de vida de Ornithodoros erraticus (Lucas, 1849) se
alimentaron con este método. Este parásito se está utilizando para detectar
nuevos fármacos con actividad contra las garrapatas blandas en un nuevo modelo
de ratón.
C. MONTES,1
C. CUADRILLERO, AND D. VILELLA Centro de Investigación Básica -Merck Research
Laboratories, Merck, Sharp & Dohme de España, S.A., Josefa Valcárcel 38,
E-28027 Madrid, España J. ed. Entomol. 39(4): 675-679 (2002)
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Recibido
para publicación el 13 de octubre de 2001, aceptado el 11 de febrero de 2002.
Traducción del artículo:
Maintenance of a Laboratory Colony of Cimex
lectularius (Hemiptera:
Cimicidae) Using an Artificial Feeding Technique PDF
–>Montes-2002
Publicado en Chinchesdecama (www.chinches.pro) el 26 de diciembre de 2012
Sobre este mismo tema podéis consultar en: http://www.chinches.pro/
